Técnicas de cuenta de huevos en heces la Técnica de Stoll

Objetivo: Identificar huevos de heces mediante la técnica de Stoll y poder contarlos.
Fundamento: Después de identificar un parásito, puede ser necesario determinar la intensidad de la infestación. Por lo general, la sintomatología de las enfermedades parasitarias se correlaciona con el número de parásitos presentes. Se conoce la eliminación diaria de huevecillos de varias especies de helmintos. Por tanto, se hace una estimación del número de parásitos al contar el número de huevos en una cantidad conocida de heces y al calcular el número de gusanos que se requieren para producir dicho número. Pero las cuentas se realizan antes y durante el tratamiento. permiten guiarlo y las realizadas después servirán como referencia para el éxito del mismo.
Procedimiento:
1.- Se llena una probeta graduada de 100 ml con 56 ml de hidróxido de sodio 0.1 N.
2.- Con un palillo aplicador se agrega las heces hasta elevar el nivel del líquido a 60 ml.
3.- Se añaden diez cuentas de vidrio, se tapa con firmeza y se agita hasta que las heces se desmoronen por completo. Puede ser necesario que las heces duras se dejen reposar con NaOH  durante varias horas o durante una noche en el refrigerador para que se ablanden.
4.-Cuando las heces están disueltas por completo, se agita el tubo un minuto y de inmediato se toman 0.075 ml de la suspensión y se colocan en un portaobjetos. Se coloca cubreobjetos de 22mm.
5.- Con el objetivo de 40x se cuentan los huevos de toda la preparación.
6.- Se efectúa dos cuentas utilizando partes separadas de alicotas de 0.075 ml de la suspensión (total=0.15ml)
Calculo:
1.- La disolución fecal original es de 1 en 15 (4ml/60ml). Como se contaron los huevos en un volumen total de 0.15 ml, el número total de éstos en 1ml de heces se encuentran al multiplicar la cuenta total por 100 (1/5 x 0.15 x 100=1)
2.- Suponiendo que el promedio de una persona rebasa los 100 g de heces por día, es posible calcular el número de huevos por día multiplicando el resultado por 100 (o la cuenta de la suspensión original por 10000)
Observaciones:

EVIDENCIAS:

Comentarios:
Para mi esta practica es muy útil pues me pareció muy interesante la forma con la que podemos contar los huevecillos ademas aprendimos a usar las perlas. Es muy útil, sencilla e interesante.

Esta practica se realizo el día 30 de Septiembre del año en curso por la alumna Estefanía Peña Renaud del 3 DM del CBTis 199.

COPROPARASITOSCÓPICO: MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR FLOTACIÓN DE WILLIS

INTRODUCCIÓN:

El objetivo de esta practica es aprender a realizar la técnica por flotación de Willis, para la búsqueda de quistes y huevos que puedan quedar en la superficie del líquido.


El método de willis esta recomendado especialmente para la investigación de protozoarios  y helmintos . Consiste en  preparar  la materia fecal con solución saturada de cloruro de sodio

Los huevos y quistes de peso  específico menor que la solución saturada de cloruro de sodio tiende a subir y adherirse a un cubreobjetos colocado en contacto con la superficie del líquido.

Reactivos  Solucion saturada de NaCl   Solucion de yodo lugol - Muestra de heces

Material

 Vaso de precipitado

  Embudo

  Tubo de ensaye

 Portaobjetos

 Cubreobjeos

  Microscopio

 

PROCEDIMIENTO

1.-Con un abatelenguas tomamos aproximadamente 1gr de heces

2.- colocamos en un vaso de precipitado y 10ml de solución saturada de cloruro de sodio.

3.-en un tubo de ensaye filtramos la mezcla con una gasa asta que el tubo se llenara.

4.-colocamos un portaobjetos en el tubo de ensaye de modo que el líquido hiciera contacto con este.

5.-esperamos durante 10minutos.

NOTA:Los quistes o huevos flotaran y quedaran adheridos a la cara del portaobjetos que este en contacto con la muestra.

6.-colocamos una gota de yodo lugol en el portaobjetos, y lo colocamos sobre el cubreobjetos.

EVIDENCIAS:

OBSERVACIONES:

 Frotis, 10x

Se encuentran regadas por todo el campo un gran número de bacterias. Destacan a las 6 pequeñas trazas de grasas

FROTIS 40x.

Sobresale a la 1 un punto color café, pero que contenía 2 núcleos:  es un quiste de Entamoeba histolytica

  CONCLUSIÓN

  Esta técnica es una más de los métodos de concentración por medio de flotación, y es capaz de concentrar prácticamente todos los huevos de nematodos.

Esta practica se realizo el 27 de Septiembre del año en curso por la alumna Estefania Peña Renaud del CBTis 199.

Fuentes de consulta:

http://www.buenastareas.com/ensayos/Metodo-De-Willis/40633.html

http://personal.us.es/cariza/web/para/practicas/cuadernos/analisis-coprologico-parasitario.pdf

Coproparasitoscopico directo

Método directo: frotis

Fundamento

Este método solo sirve para evidenciar la presencia de un determinado parasito, se trata de un metodo cualitativo que no permite conocer el numero de formas larvarias que hay por cada gramo de heces y por lo tanto la carga parasitaria.

Frotis fresco: es un metodo rapido pero poco seguro.Tiene posibilidad de falsos negativos, por lo que es necesario repatir.Permite observar la motilidad de los microorganismos: amibas y otros flagelados, detecta quistes y huevos de helmintos.

Reactivos  Sol. fisiológica al 0.9%   Sol.de yodo ü  Muestra biologia ü  Heces fecales

Material

 Portaobjetos

  Cubreobjetos

  Pipeta pasteur

 Vaso de precipitado

  Microscopio

Procedimiento

1.-Sobre un portaobjetos colocamos una porcion de heces

2.-se le agrega una gota de sol. fisiológica

3.-se coloca el cubreobjetos

4.-se observa  en el microscopio sin teñir.

5.-en otro portaobjetos limpio se repite el mismo procedimiento pero ahora se tiñe con la tincion de yodo.

 En el primer frotis de heces que hicimos pudimos observar que había algunas fibras.

En la segunda muestra solo se observaron células.

COMENTARIOS

Esta practica nos es util para poder determinar si hay quistes ,amibas o flagelos.En los frotis que hicimos ninguno presento quistes .

METODO DE CONCENTRACION-FLOTACION FAUST

Metodo de concentracion –flotacion faust

Propocito: Determinar si hay parasitos en la muestra de heses.

Introducción 

En este metodo se utiliza solucion de Zn, cuya densidad especifica es de 1.110 y facilita que los huevos: necator  y facilita que los huevos livianos de estos helmintos, con menor peso especifico que la solución se consentre y floten. La concentracion adecuada aconsejada es la que usa como reactivo una solucion acuosa de sulfato de Zn al 33% con una densidad al 1.180.El agua utilizada diluye y lava la materia fecal .El filtrado con gasa doblada evita que los detritos gruesos transpasen las paredes, la centrifugación enriquece la superficie del liquido centrifugado con los huevos livianos de algunos helmintos.

Reactivos  Sol.acuosa de sulfato de Zn ü  Muestra de heces

Materiales

  Portaobjetos

  Cubreobjetos

  Gasa

  Tubos de ensayo

Equipo:

 Microscopio

Procedimiento

1.-mezclar bien una porcion de material fecal para preparar un superficie en 10 partes de agua destilada

2.-filtrar la superficie a travez de una gasa doblada en cuatro partes, sobre un tubo.

3.-centrifugar a 2500rpm durante 1 minuto

4.-Decantar el líquido sobrenadante y completar con agua hasta igualar la medida anterior, centrifugar nuevamente.Resuspender el sedimento.

5.-repetir el procedimiento dos veces hasta que el liquido sobrenadante este listo

6.-Decantar nuevamente el liquido sobrenadante reemplazarlo por igual cantidad de solucion de sulfato de zinc al 33%,mezclar bien la solucion con el sedimento ,centrifugar durante 1 minuto a 1500 rpm.

7.-Tomar particulas que flotan en la superficie del liquido colocarlos en un portaobjetos y mezclar con 1 o 2 gotas de lugol, colocar el cubreobjetos.

OBSERVACIONES:

EVIDENCIAS: 

COMENTARIOS:

Fue muy útil para poder determinar si en las heces fecales había la presencia de residuos, huevecillos quistes o trofozoitos.

El método de Faust es el más adecuado para determinar la existencia de agentes infecciosos no solo en las heces fecales, sino también en las aguas residuales o negras.

Fuentes Consultadas:

·         Brown, H. W. Parasitología Clínica. Edit. Interamericana. México, 1985. Pp. 338-339

Esta practica se realizo el día 26 de septiembre del año en curso por la alumna del Cbtis 199 Estefania Peña.

Método de concentración por sedimentación

Método de concentración por sedimentación

INTRODUCCIÓN

Esta técnica forma parte de una serie de análisis coproparasitoscopicos considerados reconcentración fue descrita por Ritchie en 1948, es de utilidad para la búsqueda de huevos, quistes y larvas. Es empleada cuando no se observan parásitos en el método directo y para aumentar la probabilidad de observar parásitos en las muestras estudiadas.

Algunas referencias no indican el uso de malla o gasa al aplicar el método (verapartado de técnica) por lo que se pueden obtener sedimentos sucios y no con localidad requerida para una óptima observación.

Fundamento: se basa en la concentración de los quistes y huevos por sedimentación mediante la centrifugación, con la ayuda de formol y éter para separar y visualizar los elementos parasitarios.

Unas ventajas que tiene este método es concentrar y no forma las formas parasitarias, permite el transporte y almacenamiento de la materia fecal procesada antes de ser examinada, se usa cuando se necesita una técnica para evaluar de tratamiento y determinación de frecuencia.

REACTIVOS Solución salina  isotónica Solución de formaldehído al 10%        Éter

MATERIAL Y EQUIPO

Microscopio

Centrífuga

Tubos de ensaye cónicos de 15 ml

Vasos de precipitado de 50 ml

Aplicadores de madera

Pipetas Pasteur con bulbo

Cubreobjetos

Portaobjetos

METODO

1.- Con el aplicador de madera se coloca aproximadamente 1 gr. de la materia fecal en el vaso de precipitado, se añaden 10 ml de solución salina y se homogeniza.

2.-Se filtra la suspensión a través de la gasa colocada en el embudo, recogiendo el filtrado en el tubo cónico.

 3.-Se centrífuga la suspensión durante 2 min a 2000 rpm.

4.- Se decanta el sobrenadante  y se resuspende el sedimento con solución salina, centrifugando, decantando y resuspendiendo dos  veces.

5.- Al último sedimento se agregan 10 ml de solución de formaldehido al 5%, se mezcla y se deja reposar durante 10 min.

6.- Se añaden después 0.5 ml de éter, se tapan los tubos con tapones de caucho y se agitan enérgicamente durante 30 segundos.

7.- Se centrífuga durante 2 minutos a 2000 rpm.

8.- Después de centrifugar se observan 4 capas

a)    éter en la superficial,

b)    un tapón de restos fecales,

c)    formaldehido,

d)    sedimento en el fondo del tubo, conteniendo los elementos parasitarios.

Se decanta el sobrenadante

9.- Se introduce la pipeta Pasteur hasta el sedimento sacamos una gota de sedimento y lo colocamos en un portaobjetos.

10.-Se le añade una gota de lugol y con uno de los ángulos del cubreobjetos, se homogeniza, cubriéndolo con el mismo.

Al final observamos al microscopio con el objetivo 10X Y 40X las muestras.

OBSERVACIONES:

En esta práctica pudimos observar si había la presencia de quistes, pudimos practicar las otras prácticas que ya habíamos hecho y conocimos un nuevo material  que fue el tubo de ensaye cónico.

Fuentes de Información:

http://es.scribd.com/doc/51575922/Manual-de-Para-Clinica-2-2-1-1-1

http://www.buenastareas.com/ensayos/Cps-Ritchie-y-Sedimentacion-En-Copas/169594.html

Esta práctica se realizó el día 18 de Septiembre del 2011 
EVIDENCIAS

 

Por Estefanía Peña Reanaud.