lunes, 19 de marzo de 2012

Introducción:
La leucopoyésis es un proceso que se lleva a cabo con gran actividad, ya que si el número de granulocitos circulantes de ninguna manera es comparable al de los eritrocitos, en cambio se estima que la sobrevida de los neutrófilos no excede de 5 días, de las cuales solo pasan 10 hrs. en la sangre circulante.
Fundamento:
La sangre se diluye 1:2 con una solución hipotónica de ácido acético que destruye a los eritrocitos.
El azul de metileno permite reconocer fácilmente el líquido y observar mejor los glóbulos blancos, a los que tiñe ligeramente
Los normoblastos no se destruyen, por lo que se deben tomar en cuenta para corregir los resultados
Material:
  • Tubos de ensayo de 13 x 100mm
  • Pipeta de Thoma para glóbulos blancos
  • Cámara de Neubauer
  • Microscopio
  • Boquillas
  • Gasa
  • Sangre capilar o venosa con anticoagulante
Reactivos:
  • EDTA (sal disódica) al 10 %
  • Liquido de Turk:
Ácido acético glacial 3.0 ml
Agua destilada c.b.p. 100 ml
Adicionar 1 o 2 gotas de azul de metileno
Procedimiento:
1.- Llenar la pipeta con sangre bien mezclados hasta la marca de .5

2.- Limpiar cuidadosamente la pipeta por fuera

3.- Aforar con solución de Turk hasta la marca de II

4.- Agitar la pipeta durante 3 min.

5.- Se desechan las primeras 4 o 5 gotas de la pipeta y se carga la cámara de Neubauer

6.-Dejar reposar la cámara durante 3 min.

7.- En el microscopio con el objetivo de 10x, se cuentan los leucocitos presentes en los cuatro cuadros grandes de los extremos
8.- Multiplicar por 50 el promedio de los leucocitos con la siguiente fórmula
Células contadas x 20 (dilución) x 10 (corrección de altura) /
4 (núm. De cuadro de 1mm contados)
Este factor varía si se cambia la dilución y o el número de cuadros contados
*En caso de existir normoblastos (eritrocitos nucleados) deberá hacer la cuenta diferencial leucocitaria
Valores de referencia:
Leucocitos:
-Adultos: 5000 - 10 000 / mm3
- Recién nacidos: 10 000 - 25 000 / mm3
-Niños: 8000 - 15 000

OBSERVACIONES:
Cámara de Neubauer, 40x
Enfocando uno de los cuadros laterales, se aprecian claramente los 16 cuadros pequeños donde se tienen que contar los leucocitos que hay en ellos. Se debe de tener cuidado de no confundir los restos de eritrocitos hemolizados con los leucocitos, que deben de aparecer como puntos purpuras o negros, como los que están a las 9
RESULTADOS
Los recuentos de leucocitos, al igual que los eritrocitos,  se expresan como concentraciones, que en este caso serían número de células por unidad de volumen de sangre, que es 1mm3
Después de contar los glóbulos blancos de los 4 cuadrados angulares, se suman el total de ellos y con dicha cantidad de hace el siguiente cálculo:
N° de leucocitos x mm3 = altura x dilución x área 
N° de leucocitos x mm3 = 1/10 x 1/20 x 4 = 1/10 000
N° de leucocitos x mm3 = 4/200 = 1/50
N° de leucocitos x mm3 = N° de leucocitos contados x 50

En el análisis hecho,  los resultados de la cuenta de células quedaron así por casilla:

El número de leucocitos fue de 111, que al multiplicarse por 50 daba como resultado    5 550/mm3, lo que indica un índice normal, sin embargo apenas y supera el mínimo, pues el paciente era un hombre, de 41 años de edad.
VALORES DE REFERENCIA
(Millones de células/mm3)
Hombres y Mujeres:………………………………..5 000-10 000


BIBLIOGRAFIA:
http://html.rincondelvago.com/manual-de-hematologia.html 
http://edurirom.blogspot.mx/2012/03/practica-no5-recuento-de-leucocitos.html 
  • Hematología, Salvat, Williams-Heuter-Erstev-Hundles, Tomo I y II
  • Cellules du sang normal et pathologiques, M. Bessis.
    • Martínez Fragoso, Vicente. Manual de Biometría Hemática.CBTis199, México, 2012. Pp. 22-24




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domingo, 11 de marzo de 2012

PROCESAR CULTIVOS BACTERIOLOGICOS PRACTICA NO.1














Objetivo

Aprender las técnicas para poder saber preparar un frotis de fijación y coloración mas utilizados, así como identificar los diferentes tipos de bacterias



Fundamento

Debido al pequeño tamaño de la mayoría de los microorganismos, se requiere de un microscopio óptico, ya sea de campo claro o de campo oscuro para poder realizar la descripción de estos.
El microscopio más común es el de campo claro, en el cual la observación de células vivas es limitada, debido a que estas son incoloras y permiten el paso de un gran cantidad de luz.
Debido a este factor, la observación de frotis teñido es más recomendable.
Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida. Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los métodos habituales de tinción que permiten la observación al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados.
Los frotis de cultivos líquidos se deberán fijar con alcohol para evitar residuos del medio que al quemarse darán interferencias en las observaciones y los de colonias de medios sólidos se fijan generalmente con calor. 

SUSTANCIAS:
  
  Azul de metileno
  Alcohol etílico
  Fenol
         Muestra biológica: heces fecales frescas y orina


MATERIAL
Mechero de Bunsen
 Asa de siembra
  Portaobjetos
Microscopio
 Pizeta
 Tubos de ensayo
                                                                                                         Centrifuga

v  





Preparación de frotis:
 1.-Lavar  y secar perfectamente los portaobjetos
       2.-Limpiar la mesa con fenol
       3.-Prender el mechero y esterilizar el asa en la flama del mechero hasta que se ponga al rojo       vivo
    4.-  Dejar enfriar el asa para evitar que al tomar la muestra los microorganismos sean destruidos. Después acercar al mechero el tubo de cultivo, quitarle el tapón y flamear rápidamente la boca del mismo, introducir el asa en el tubo de cultivo y tomar cuidadosamente la muestra
    5.- Para el caso de cultivos líquidos, colocar la muestra en el centro del portaobjetos, extender suavemente en una área circular de 2 cm de diámetro aproximadamente y esterilizar nuevamente el asa. Dejar secar el frotis al aire
     6._Si el cultivo es en medio solido, previamente se colocará en el centro del portaobjetos una gota de agua destilada en la que se mezcla una pequeña muestra del cultivo que se toma siguiendo las indicaciones del paso 4, extenderla suavemente y dejar secar al aire.

7.- con una pipeta pasteur tomamos un poco de orina y la pasamos a un tubo de ensayo y lo centrifugamos a 3000rpm durante 5 minutos.

  8.-  como hubo sedimento en la orina decantamos un poco y con la asa flameada tomamos un poco de la muestra y lo colocamos en el frotis
}
 9.-Llenamos a la mitad un tubo de ensayo con agua destilada. Con un aplicador tomamos un poco de muestra de heces y esta la disolvimos en el agua

10.-Del tubo de agua con un poco de heces disueltas, se flamea el asa, se mete al tubo  y tomamos un poco de muestra y lo colocamos en un portaobjetos















fijación del frotis:
  1.    Fijar los frotis de cultivos líquidos con dos gotas de metanol o etanol absoluto y dejar secar al aire (hacer esto en zonas alejadas del mechero)
  2.    Los frotis de cultivos sólidos, completamente secos se fijaran con calor. Para esto se pasará el frotis rápidamente 2-3 veces en el interior de la parte amarilla de la flama del mechero
  3.    Palpar la parte inferior del portaobjetos con el dorso de la mano izquierda para enfriar y comprobar que no hubo sobrecalentamiento.



Tinción simple:
   1.    Cubrir el frotis con 2 gotas de azul de metileno durante 30 segundos a 1 minuto


 2.    Eliminar el exceso de colorante con lavado de  agua y despues se deja secar al aire

OBSERVACIONES:

Frotis cultivo agar sangre 10x
el cultivo era de exudado vaginal, asi que encontramos Gardnerella vaginalis

100x
En el frotis de orina Observamos células epiteliales,también observamos bacilos de Escherichia coli


En el frotis  de eses  encontramos e.coli



CONCLUSIÓN
Es importantes saber cuales son los pasos para poder realizar los frotis ya que si no se hacen bien podemos equivocarnos al dar los resultados a los pacientes
La Gardnerella Vaginalis es un microorganismo Gram negativo, que en la colonización vaginal patológica puede estar acompañado también por microorganismos aerobios, anaerobios y otros gérmenes: Infecciones del Tracto Genital Inferior (ITGI), o antes: Vaginosis Bacteriana (VB)


Biobliografia:

http://www.joseacortes.com/practicas/frotisbact.htm
http://www.lamujerylapareja.com.ar/gardnerella%20vaginalis.htm

http://html.rincondelvago.com/gardnerella-vaginalis.html

Gardnerella vaginalis, consultado el día 5 de marzo del 2012, enhttp://html.rincondelvago.com/gardnerella-vaginalis.html
·         Preparación de frotis bacteriano, consultado el día 6 de marzo 2012 enhttp://www.joseacortes.com/practicas/frotisbact.htm
·         Manual práctico de Microbiología ambiental, consultado el 8 de marzo 2012 en http://es.scribd.com/doc/57234084/27/TINCION-SIMPLE 




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sábado, 10 de marzo de 2012

Practica No. 4 CUENTA DE ERITROCITOS

 CUENTA DE ERITROCITOS
Introducción:
Cuando la eritropoyésis tiene lugar normalmente, su resultado final es la producción de una célula-eritrocito perfectamente diferenciada y apta para su función principal que es la de transportar oxígeno y CO2 . La falta de núcleo le confiere la virtud de acarrear el oxígeno sin consumir prácticamente nada de el; su forma bicóncava es la que mejor se presta para afrontar la hemólisis; su membrana no admite la salida de hemoglobina.

Fundamento teórico:
Consiste en diluir la sangre con el líquido de Hayem en una proporción exacta y luego examinar al microscopio una pequeña cantidad de la muestra colocada en la cámara de Neubauer, contando el número de elementos que se encuentran en el retículo de la cámara y mediante una operación matemática se obtiene la cifra total.

Material:
  • Tubos de ensayo de 13x100mm
  • pipetas de Thomas para glóbulos rojos
  • cámara de Neubauer
  • boquillas
  • microscopio
  • gasa
  • gradilla
  • sangre capilar o venosa con anticoagulante
  • Cámara de Neubauer
La que más se utiliza es la de Neubauer que presenta un retículo con una superficie total de 9mm2 dividida en 9 cuadros de 1mm2 los cuatro cuadros grandes de los extremos son los que usualmente se emplean para contar leucocitos. De los 9 cuadros centrales grandes el central es el único dividido en 25 cuadros.



Reactivos:
  • EDTA (sal di sódica) al 10%
  • Líquido de Hayem:
Cloruro de mercurio 0.5 g
Cloruro de sodio 1.0g
Sulfato de sodio 5.0g
Agua destilada 100ml
Procedimiento:
Las pipetas están constituidas por dos porciones capilares y un bulbo central. El tubo capilar inferior está dividido en 10 partes iguales con marcos de0.5 y 1.0.
En el interior del bulbo existe una perlita de plástico (roja), para favorecer la mezcla de la sangre con el líquido y en el capilar superior hay una marca 101


1.- llenar con sangre bien mezclada la pipeta de Thoma, hasta la marca 0.5.

2.- se limpia cuidadosamente con gasa la parte externa de la pipeta.
3.- completar con líquido de Hayem hasta la marca 101.

4.- agitar durante 3 minutos para mezclar perfectamente.

5.- colocar el cubre hematímetro sobre la cámara.
6.- desechar las primeras 4-5 gotas de la pipeta y llenar la cámara por uno de los bordes del cubre hematímetro.

7.- se deja que el líquidos penetre lentamente entre la cuadrícula y el cubre hematímetro hasta que la plataforma de recuento este completamente cubierto.
8.- dejar reposar de 3.5 minutos sobre la platina del microscopio.
9.- con objetivo de 40x se encuentra los eritrocitos contenidos en 80 cuadros pequeños; uno central y cuatro de los extremos.
OBSERVACIONES:
                                                Cámara de Neubauer, 10x
El rayado de la cámara de Neubauer cubierta de miles de eritrocitos, que destacan por su forma redonda y gran cantidad.
Cámara de Neubauer, 40x
Enfocando el cuadro central de los cuadros pequeños, se aprecian claramente los 16 cuadritos pequeños donde se tienen que contar los eritrocitos que hay en ellos.



RESULTADOS:


Los recuentos de eritrocitos  se expresan como concentraciones, que en este caso serían número de células por unidad de volumen de sangre, que es 1mm3
Después de contar los hematíes de los 5 cuadrados pequeños, se suman y con dicha cantidad de hace el siguiente cálculo:
N° de hematíes x mm3 = altura x dilución x área  
N° de hematíes x mm3 = 1/10 x 1/200 x 1/5 = 1/10 000
N° de hematíes x mm3 = hematíes contados x 10 000

En el análisis hecho, el número de eritrocitos fue de 491, que al multiplicarse por 10 000 daba como resultado 4 910 000/mm3, lo que indica un índice normal pues el paciente era una mujer de 11 años de edad.
VALORES DE REFERENCIA
(Millones de células/mm3)
Hombres:………………………………..4 500 000-5 500 000
Mujeres:…………………………...…….4 000 000-5 000 000
Niños (4 años):……….........................4 200 000-5 200 000
Lactantes (1-6 meses):....…………….3 800 000-5 200 000
Recién nacidos:………………………..5 000 000-6 000 000


Cálculos:
Si se considera que el retículo central tiene 400 cuadritos se realizará el siguiente cálculo.
N x 200 x 10 x 400 = N x 10,000
80
N= número de eritrocitos contados
200= factor de dilución
10= corrección x altura de la cámara
Valores de referencia:
Hombres 4.5 x 106 - 5.5 x 106 mm3
Mujeres 4.3 x 106 - 5.0 x 106 mm3


Razones por las que se realiza el examen

El conteo de glóbulos rojos casi siempre forma parte de un CSC (conteo sanguíneo completo).
Este examen puede ayudar a diagnosticar anemia y otros problemas de salud que afectan los glóbulos rojos.
Afecciones adicionales bajo las cuales se puede realizar el examen:

Valores normales

El rango general es como sigue:
  • Hombre: de 4.7 a 6.1 millones de células por microlitro (células/mcL)
  • Mujer: de 4.2 a 5.4 millones de células/mcL
Nota: los rangos de los valores normales pueden variar ligeramente entre diferentes laboratorios. Hable con el médico acerca del significado de los resultados específicos de su examen.
Los ejemplos anteriores muestran las mediciones comunes para los resultados de estas pruebas. Algunos laboratorios usan diferentes medidas o podrían evaluar diferentes muestras.

Significado de los resultados anormales

Los números de glóbulos rojos más altos de lo normal pueden deberse a:
El conteo de glóbulos rojos se incrementará durante varias semanas cuando usted se traslade a una altitud mayor.
Los fármacos que pueden incrementar los conteos de glóbulos rojos abarcan:
  • Gentamicina
  • Metildopa
Los números de glóbulos rojos más bajos de lo normal pueden deberse a:
  • Anemia
  • Insuficiencia de la médula ósea (ejemplo, por radiación, toxinas o tumor)
  • Deficiencia de eritropoyetina (secundaria a enfermedad renal)
  • Hemólisis (destrucción de glóbulos rojos) debido a transfusión, lesión vascular u otra causa
  • Hemorragia (sangrado)
  • Leucemia
  • Desnutrición
  • Mieloma múltiple
  • Deficiencias nutricionales de:
  • Sobrehidratación
  • Embarazo
Los fármacos que pueden disminuir el conteo de glóbulos rojos son, entre otros:
  • Fármacos quimioterapéuticos
  • Cloramfenicol
  • Hidantoína
  • Quinidina

Riesgos

Extraer una muestra de sangre implica muy poco riesgo. Las venas y las arterias varían en tamaño de un paciente a otro y de un lado del cuerpo a otro, razón por la cual extraer sangre de algunas personas puede ser más difícil que de otras.
Otros riesgos asociados con la extracción de sangre son leves, pero pueden ser:
  • Sangrado excesivo
  • Desmayo o sensación de mareo
  • Hematoma (acumulación de sangre debajo de la piel)
  • Infección (un riesgo leve cada vez que se presenta ruptura de la piel)

Nombres alternativos

Conteo de eritrocitos; Conteo de glóbulos rojos sanguíneos


CONCLUSIÓN
Los eritrocitos o glóbulos rojos son células de color amarillento, con la forma  de un disco bicóncavo, sin núcleo y contienen un pigmento llamado hemoglobina que les otorga su característico color.
Estos se forman constantemente en la medula ósea, en el cráneo, las costillas, las vértebras y el esternón, en un proceso conocido como eritropoyesis. Viven aproximadamente 120 días y al envejecer son destruidos por las células reticuloendoteliales del  hígado, la medula ósea y el bazo.
La falta de núcleo le confiere la virtud de acarrear oxigeno sin consumir nada de él.  
La pipeta de Thoma para glóbulos rojos está constituida por dos porciones capilares y un bulbo central. El tubo capilar inferior está dividido en 10 partes iguales con marcas de 0.5 y 1.0. En el interior del bulbo existe una perlita de plástico roja para favorecer la mezcla de sangre con el líquido y en el capilar superior hay una marca de 101.

El líquido de dilución no solamente debe de diluir los eritrocitos hasta cifras legibles, sino que también permita identificarlos y que destruya otros elementos celulares que no son de interés en este momento. En general se puede usar cualquier solución isotónica como diluyente y pueden ser:
Y  Soluciones de Gower
Y  Soluciones de Dace
Y  Solución salina de NaCl al 0.9%
Y  Liquido de Hayem, el cual está formado de 5g de NaCl, 2.5g de Na2SO4, 2.5g de MgCl2 y agua destilada para un litro. Este último es el más usado.
Es muy importante observar que en la cámara de Neubauer las áreas de recuento de eritrocitos y linfocitos son diferentes.
Los glóbulos rojos se cuentan en las áreas coloreadas de rojo, mientras que los glóbulos blancos se cuentan en las áreas coloreadas de azul. 




Para realizar el conteo se enfoca con el objetivo 40x, y se localiza el cuadro central con el condensador bajo y luz débil.
Para proceder al recuento, que se lleva a cabo en los cuadrados pequeños del retículo marcado en color rojo, contando las células en cada cuadro, en barrido o fila.

BIOGRAFIA:

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003644.htm

http://html.rincondelvago.com/manual-de-hematologia.html

http://edurirom.blogspot.com/2012/03/practica-no-4-cuenta-de-eritrocitos.html


Zuckerman K. Approach to the anemias. In: Goldman L, Ausiello D, eds. Cecil Medicine. 23rd ed. Philadelphia, Pa: Saunders Elsevier; 2007:chap 162.

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