Objetivo
Aprender las técnicas para poder saber preparar un frotis de fijación y coloración mas utilizados, así como identificar los diferentes tipos de bacterias
Fundamento
Debido al pequeño tamaño de la mayoría de los microorganismos, se requiere de un microscopio óptico, ya sea de campo claro o de campo oscuro para poder realizar la descripción de estos.
El microscopio más común es el de campo claro, en el cual la observación de células vivas es limitada, debido a que estas son incoloras y permiten el paso de un gran cantidad de luz.
Debido a este factor, la observación de frotis teñido es más recomendable.
Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida. Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los métodos habituales de tinción que permiten la observación al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados.
Los frotis de cultivos líquidos se deberán fijar con alcohol para evitar residuos del medio que al quemarse darán interferencias en las observaciones y los de colonias de medios sólidos se fijan generalmente con calor.
SUSTANCIAS: Azul de metileno Alcohol etílico Fenol Muestra biológica: heces fecales frescas y orina |
MATERIAL
Mechero de Bunsen
Asa de siembra
Portaobjetos
Microscopio
Pizeta
Tubos de ensayo
Centrifuga
v
Preparación de frotis:
1.-Lavar y secar perfectamente los portaobjetos
1.-Lavar y secar perfectamente los portaobjetos
2.-Limpiar la mesa con fenol
3.-Prender el mechero y esterilizar el asa en la flama del mechero hasta que se ponga al rojo vivo
4.- Dejar enfriar el asa para evitar que al tomar la muestra los microorganismos sean destruidos. Después acercar al mechero el tubo de cultivo, quitarle el tapón y flamear rápidamente la boca del mismo, introducir el asa en el tubo de cultivo y tomar cuidadosamente la muestra
5.- Para el caso de cultivos líquidos, colocar la muestra en el centro del portaobjetos, extender suavemente en una área circular de 2 cm de diámetro aproximadamente y esterilizar nuevamente el asa. Dejar secar el frotis al aire
6._Si el cultivo es en medio solido, previamente se colocará en el centro del portaobjetos una gota de agua destilada en la que se mezcla una pequeña muestra del cultivo que se toma siguiendo las indicaciones del paso 4, extenderla suavemente y dejar secar al aire.
7.- con una pipeta pasteur tomamos un poco de orina y la pasamos a un tubo de ensayo y lo centrifugamos a 3000rpm durante 5 minutos.
8.- como hubo sedimento en la orina decantamos un poco y con la asa flameada tomamos un poco de la muestra y lo colocamos en el frotis
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9.-Llenamos a la mitad un tubo de ensayo con agua destilada. Con un aplicador tomamos un poco de muestra de heces y esta la disolvimos en el agua
10.-Del tubo de agua con un poco de heces disueltas, se flamea el asa, se mete al tubo y tomamos un poco de muestra y lo colocamos en un portaobjetos
fijación del frotis:
1. Fijar los frotis de cultivos líquidos con dos gotas de metanol o etanol absoluto y dejar secar al aire (hacer esto en zonas alejadas del mechero)
2. Los frotis de cultivos sólidos, completamente secos se fijaran con calor. Para esto se pasará el frotis rápidamente 2-3 veces en el interior de la parte amarilla de la flama del mechero
3. Palpar la parte inferior del portaobjetos con el dorso de la mano izquierda para enfriar y comprobar que no hubo sobrecalentamiento.
Tinción simple:
1. Cubrir el frotis con 2 gotas de azul de metileno durante 30 segundos a 1 minuto
2. Eliminar el exceso de colorante con lavado de agua y despues se deja secar al aire
OBSERVACIONES:
Frotis cultivo agar sangre 10x
el cultivo era de exudado vaginal, asi que encontramos Gardnerella vaginalis
.jpg)
100x
En el frotis de orina Observamos células epiteliales,también observamos bacilos de Escherichia coli
En el frotis de eses encontramos e.coli
CONCLUSIÓN
Es importantes saber cuales son los pasos para poder realizar los frotis ya que si no se hacen bien podemos equivocarnos al dar los resultados a los pacientes
La Gardnerella Vaginalis es un microorganismo Gram negativo, que en la colonización vaginal patológica puede estar acompañado también por microorganismos aerobios, anaerobios y otros gérmenes: Infecciones del Tracto Genital Inferior (ITGI), o antes: Vaginosis Bacteriana (VB)
Biobliografia:
Gardnerella vaginalis, consultado el día 5 de marzo del 2012, enhttp://html.rincondelvago.com/gardnerella-vaginalis.html
· Preparación de frotis bacteriano, consultado el día 6 de marzo 2012 enhttp://www.joseacortes.com/practicas/frotisbact.htm
· Manual práctico de Microbiología ambiental, consultado el 8 de marzo 2012 en http://es.scribd.com/doc/57234084/27/TINCION-SIMPLE
Muy bien, completa y de fotos, para que más!!
ResponderEliminarSaludos