Introducción:
La leucopoyésis es un proceso que se lleva a cabo con gran actividad, ya que si el número de granulocitos circulantes de ninguna manera es comparable al de los eritrocitos, en cambio se estima que la sobrevida de los neutrófilos no excede de 5 días, de las cuales solo pasan 10 hrs. en la sangre circulante.
Fundamento:
La sangre se diluye 1:2 con una solución hipotónica de ácido acético que destruye a los eritrocitos.
El azul de metileno permite reconocer fácilmente el líquido y observar mejor los glóbulos blancos, a los que tiñe ligeramente
Los normoblastos no se destruyen, por lo que se deben tomar en cuenta para corregir los resultados
Material:
- Tubos de ensayo de 13 x 100mm
- Pipeta de Thoma para glóbulos blancos
- Cámara de Neubauer
- Microscopio
- Boquillas
- Gasa
- Sangre capilar o venosa con anticoagulante
Reactivos:
- EDTA (sal disódica) al 10 %
- Liquido de Turk:
Ácido acético glacial 3.0 ml
Agua destilada c.b.p. 100 ml
Adicionar 1 o 2 gotas de azul de metileno
Procedimiento:
1.- Llenar la pipeta con sangre bien mezclados hasta la marca de .5
2.- Limpiar cuidadosamente la pipeta por fuera
3.- Aforar con solución de Turk hasta la marca de II
4.- Agitar la pipeta durante 3 min.
5.- Se desechan las primeras 4 o 5 gotas de la pipeta y se carga la cámara de Neubauer
6.-Dejar reposar la cámara durante 3 min.
7.- En el microscopio con el objetivo de 10x, se cuentan los leucocitos presentes en los cuatro cuadros grandes de los extremos
8.- Multiplicar por 50 el promedio de los leucocitos con la siguiente fórmula
Células contadas x 20 (dilución) x 10 (corrección de altura) /
4 (núm. De cuadro de 1mm contados)
Este factor varía si se cambia la dilución y o el número de cuadros contados
*En caso de existir normoblastos (eritrocitos nucleados) deberá hacer la cuenta diferencial leucocitaria
Valores de referencia:
Leucocitos:
-Adultos: 5000 - 10 000 / mm3
- Recién nacidos: 10 000 - 25 000 / mm3
-Niños: 8000 - 15 000
OBSERVACIONES:
Cámara de Neubauer, 40x
Enfocando uno de los cuadros laterales, se aprecian claramente los 16 cuadros pequeños donde se tienen que contar los leucocitos que hay en ellos. Se debe de tener cuidado de no confundir los restos de eritrocitos hemolizados con los leucocitos, que deben de aparecer como puntos purpuras o negros, como los que están a las 9
RESULTADOS
Los recuentos de leucocitos, al igual que los eritrocitos, se expresan como concentraciones, que en este caso serían número de células por unidad de volumen de sangre, que es 1mm3
Después de contar los glóbulos blancos de los 4 cuadrados angulares, se suman el total de ellos y con dicha cantidad de hace el siguiente cálculo:
N° de leucocitos x mm3 = altura x dilución x área
N° de leucocitos x mm3 = 1/10 x 1/20 x 4 = 1/10 000
N° de leucocitos x mm3 = 4/200 = 1/50
N° de leucocitos x mm3 = N° de leucocitos contados x 50
En el análisis hecho, los resultados de la cuenta de células quedaron así por casilla:
El número de leucocitos fue de 111, que al multiplicarse por 50 daba como resultado 5 550/mm3, lo que indica un índice normal, sin embargo apenas y supera el mínimo, pues el paciente era un hombre, de 41 años de edad.
VALORES DE REFERENCIA
(Millones de células/mm3)
Hombres y Mujeres:………………………………..5 000-10 000
BIBLIOGRAFIA:
- Hematología, Salvat, Williams-Heuter-Erstev-Hundles, Tomo I y II
- Cellules du sang normal et pathologiques, M. Bessis.
- Martínez Fragoso, Vicente. Manual de Biometría Hemática.CBTis199, México, 2012. Pp. 22-24
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